基于雞胚絨毛膜尿囊膜的化妝品眼刺激安全性評(píng)價(jià)
眼刺激
眼刺激，在《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》中的釋義是，眼球表面，包括角膜、鞏膜以及結(jié)膜部分，接觸受試物后所產(chǎn)生的可逆性炎性變化。急性眼刺激試驗(yàn)是用以確定和評(píng)價(jià)化妝品原料及其產(chǎn)品對(duì)哺乳動(dòng)物的眼睛是否有刺激作用及其程度。
長(zhǎng)期以來，皮膚、眼睛刺激性試驗(yàn)主要依賴動(dòng)物試驗(yàn)。家兔的眼刺激試驗(yàn)（Draize 試驗(yàn)）自20 世紀(jì) 40 年代起作為評(píng)價(jià)化妝品及其原料眼刺激的主要方法，是很多國(guó)家管理機(jī)構(gòu)的毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)常規(guī)測(cè)試方法之一。但很多研究顯示此方法存在評(píng)分系統(tǒng)主觀、實(shí)驗(yàn)室間變異性以及動(dòng)物外推至人的種屬差異等缺點(diǎn)。
近年來隨著“3Rs”原則（Reduction，減少試驗(yàn)中使用的動(dòng)物數(shù)量；Refinement，緩解或減輕動(dòng)物的疼痛和痛苦；Replacement，替代整體動(dòng)物試驗(yàn)）的興起，動(dòng)物福利日趨受到重視，家兔的眼刺激性試驗(yàn)在倫理上與科學(xué)上均受到質(zhì)疑；近年來，以歐盟為首的全球眾多國(guó)家和地區(qū)紛紛呼吁禁止在化妝品安全評(píng)價(jià)中使用動(dòng)物試驗(yàn)，積極推動(dòng)家兔眼刺激性試驗(yàn)的替代方法研究的發(fā)展。
基于雞胚絨毛膜尿囊膜的試驗(yàn)
這類試驗(yàn)是利用雞胚絨毛膜尿囊膜（chicken chorioallantoic menbrane，CAM）與人結(jié)膜相似的特點(diǎn)開發(fā)的替代試驗(yàn)，以CAM為替代材料研究化妝品的眼刺激性。
01
雞胚絨毛膜尿囊膜試驗(yàn)(HET-CAM)
試驗(yàn)方法
以0.3 ml受試物直接加至第10天雞胚氣室底部的CAM，觀察出血、血管溶解和凝血(大中血管內(nèi)血栓形成或雞胚蛋白混濁)等終點(diǎn)，計(jì)算刺激評(píng)分(irritation score. IS）
評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)
預(yù)測(cè)模型可采用反應(yīng)時(shí)間法(即測(cè)定每一種反應(yīng)終點(diǎn)出現(xiàn)的時(shí)間)或刺激閾值法(即測(cè)定導(dǎo)致上述毒性終點(diǎn)發(fā)生的受試物濃度)。
HET-CAM主要適用于無刺激到輕度刺激物的預(yù)測(cè)或篩選，對(duì)中度以上的刺激物應(yīng)補(bǔ)充其它實(shí)驗(yàn)確認(rèn)。適合HET-CAM檢測(cè)的化合物包括多種類型液體原料和產(chǎn)品，特別適用于表面活性劑和表面活性劑配方，對(duì)固體、不溶性或粘稠物質(zhì)的測(cè)試重復(fù)性較差，色素和染料測(cè)試應(yīng)慎重。
02
絨毛膜尿囊膜血管試驗(yàn) (CAMVA）
試驗(yàn)方法
在4日齡受精雞胚上開口，抽取去除約3 mL蛋清，人為造成CAM。第10天時(shí)，將不同濃度稀釋的受試物直接暴露于CAM中的“O”形特富龍環(huán)，孵育30 min后觀察CAM血管變化，包括出血、充血、鬼影血管等，將使50%的受精雞胚出現(xiàn)反應(yīng)的受試物濃度（RC50）作為檢測(cè)終點(diǎn)。
評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)
計(jì)算使50%的雞胚出現(xiàn)上述損傷的受試物濃度。RC50>3%，無刺激性；RC50≤3%，有刺激性。
CAMVA法適用于輕度到中度眼刺激性化合物的檢測(cè)，也可正確區(qū)分刺激物和非刺激物，但不能用于嚴(yán)重刺激性物質(zhì)的分類。適于檢測(cè)物質(zhì)的類型同HET-CAM法。
注:①表面活性劑;②除表面活性劑以外的其它可溶性化合物;③固體和粘性難溶化合物
用CAM方法評(píng)估特定種類化學(xué)品眼刺激性的試驗(yàn)都顯示了較滿意結(jié)果。如Budai等用HET-CAM對(duì)6種殺蟲劑的眼刺激性評(píng)估結(jié)果與Draize試驗(yàn)結(jié)果有很好相關(guān)性，僅在刺激分級(jí)上有所不同。
基于雞胚絨毛膜尿囊膜的試驗(yàn)如HET-CAM，CAMVA已獲得歐盟許可，并且一些歐盟國(guó)家已將其用于化妝品安全性評(píng)價(jià)。上海日用化妝品行業(yè)協(xié)會(huì)也出具了相應(yīng)的團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)T/SHRH 011-2018 《化妝品眼刺激性/腐蝕性的雞胚絨毛尿囊膜試驗(yàn)》，上述試驗(yàn)方法將會(huì)在化妝品原料及其產(chǎn)品的安全性評(píng)價(jià)和濃度篩選中發(fā)揮作用，助力化妝品行業(yè)的蓬勃發(fā)展。
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